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实验步骤

• 1.1 将人的PBMC细胞重悬于含1% HSA的PBS缓冲液中，取样计数，取1×10⁷个细胞至1.5mL EP管中，1500rpm，离心5min。

• 1.2 取80μL MaxSortin®细胞分选缓冲液（MS-BF）重悬细胞，加入20μL CD3分选磁珠，混匀后将其放入2~8℃冰箱孵育15min。

• 1.3 取MaxSortin® L型分离柱（MS-CL01）放入MACS分选器 (130-090-976) 上，用1mL 细胞分选缓冲液润洗两次。

• 1.4 将孵育完成后的样品从2~8℃冰箱取出，加入1mL细胞分选缓冲液，1500rpm，5min离心，弃上清。

• 1.5 加入1mL 细胞分选缓冲液重悬，将样品加入L型分离柱中，待其自然流出后，分两次加入细胞分选缓冲液，每次加1mL，15mL离心管收集流出液。

• 1.6 待细胞分选缓冲液全部流出后，将L型分离柱从MACS分选器上取下，放到另一新的15mL离心管中，向L型分离柱中加入3mL 细胞分选缓冲液，用活塞将液体直接打出。

• 1.7 将装有收集液的15mL离心管放入水平离心机，1500rpm，离心5min。

• 1.8 离心完成后倒掉上清，取1mL 1×DPBS溶液重悬细胞，计数并进行流式检测。

• 注意事项

  1.磁珠与细胞孵育时需要彻底混匀，以提高分选效率。
  2. 应用该产品去除分选CD3+细胞时，需适当加大磁珠用量。
  3. 使用前可将本产品放置于50mL离心管中，1000rpm离心1min，将胶塞残留磁珠离心至瓶底。