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DAB显色液试剂盒是一种基于HRP(辣根过氧化物酶)催化的显色试剂,主要用于免疫组织化学(IHC)实验中靶标检测。显色液A与显色液B混合生成DAB工作液,在目标分子位置形成稳定的棕色沉淀,适于显微镜观察。
操作步骤:
1. DAB工作液的配制
配制比例:
显色液A(20×):50 µL
显色液B(1×):950 µL
混合均匀后即可使用,配制好的工作液应在2小时内使用,超过时间易失效。
2. 样品显色处理
在完成抗体孵育步骤后,用PBS或TBS-T洗涤样品3次,每次3分钟,去除未结合抗体。
将新鲜配制的DAB工作液均匀滴加至样品表面,确保完全覆盖。
室温显色2-10分钟,显色时间根据目标信号的强弱实时调整。
3. 反应终止
显色完成后,用蒸馏水或PBS冲洗样品3次,终止反应。
4. 后续处理
可选择苏木精复染样品,随后进行脱水、透明并封片。
显微镜下观察棕色沉淀是否清晰显示目标分子位置。
注意事项:
1. 储存和稳定性:
储存条件:2-8℃避光保存,单支试剂在每次使用后,应立即放回盒中。
有效期:12个月
注意:DAB工作液现配现用,需在2小时内完成使用,超过时间请勿继续使用。
2. 显色时间控制:
显色时间过长可能导致背景增强,建议在显微镜下实时监测显色进度。
3. 安全事项:
DAB为潜在致癌物,操作时需佩戴手套、护目镜,避免直接接触皮肤和吸入蒸气。
实验结束后,废液需按实验室规定处理,不得随意排放。
4. 试剂操作:
使用时显色液A建议在冰上暂存,或在每次使用后立即放回冰箱。
| 组分 | 规格1 | 规格2 | 用途 |
|---|---|---|---|
| 显色液A | 3 x 1 mL | 10 mL | 20×浓缩液,需稀释使用 |
| 显色液B | 60 mL | 2x100 mL | 1×缓冲液,提供反应环境及过氧化氢 |