伯仪生物ACE
BK0060-t
RIPA裂解液（强，含抑制剂)
RIPA 裂解液(强)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强的裂解作用，是一种经典的细胞组织快速裂解液，可以从培养的哺乳动物细胞(包括铺板细胞和团状悬浮细胞)中高效裂解并提取蛋白。提取的蛋白可用于常规的 PAGE、Western blot、IP 等。
产品简介
使用方法
1 贴壁细胞:1)吸弃培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。2)按照6孔板每孔,加入 150-250 uL裂解液的比例加入 RIPA 裂解液(强),1.5-2.5uL100XPMSE,用枪吹打数下,使 RIPA 裂解液(强)和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞 1-2sec后,细胞就会被裂解。
2 悬浮细胞:
1)800g4℃℃离心5分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(10“cells=~20uL,10?cells =~100μL)。2)每 50-100μL 加入 250-500μLRIPA裂解液(强),1.5-2.5μL100XPMSF,冰浴放置 10min,并每隔5min 在漩涡混合仪上振荡 30sec;注意:如果所得蛋白产物较为粘稠,可先 95°℃加热 5min,迅速冰浴 5min,再进行下一步骤。3)12,000g 4°C离心 10min,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物。
3 组织样品:
1)把组织剪切成细小的碎片,用预冷的 PBS 洗涤2 次离心弃去 PBS。2)按照每 20mg组织加入 150-250μL 裂解液的比例加入 RIPA 裂解液(强),1.5-2.5μL100XPMSF。如果裂解不充分可以适当增加 RIPA 裂解液(强)的体积,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。3)用充分匀浆样品,也可以液氮研磨组织样品,研磨充分后加入 RIPA 裂解液(强)进行裂解。4)充分裂解后,12,000g4°℃离心 10min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western blot 和 IP 等操作。
产品参数
产品应用
1）本产品适用于普通的 Western、IP，该裂解液裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状 DNA 团块形成，不必采用超声处理等就可以非常 理想地用于后续操作。
2）也适合用于磷酸化蛋白的 Western blot 检测。
注意事项
1）裂解样品的所有步骤都需要在冰上或 4℃进行。
2）选择合适的裂解液也需要通过一些预实验来摸索符合实验的最佳条件。
3）本产品含有高浓度的去污剂，不适合使用 Bradford 法测定蛋白浓度，请使用 BCA 法（BK0001-01、BK0001-02）。
